重组蛋白表达永远不是一蹴而就的事情,任何一种方案不会适用于所有案例,如表1所示,总结了一些常见的蛋白表达技术问题及其应对策略。
表1常见E.coli蛋白表达系统技术问题与策略汇总 | ||
问题 | 可能的原因 | 解决策略 |
无或低蛋白表达 | 诱导前,蛋白有毒性 | 控制本底表达水平: |
诱导后,蛋白有毒性 | 控制诱导表达水平: | |
密码子偏爱性 | DNA密码子优化,以适应宿主密码子体系 | |
包涵体形成 | 不正确的二硫键形成 | 采取分泌性表达策略 |
不正确的折叠 | 共表达分子伴侣,促进蛋白正确折叠 | |
低可溶性蛋白形成 | 改变融合伴侣蛋白,促进可溶蛋白表达 | |
需要至关重要的翻译后修饰 | 改变表达宿主,如原核改变成真核表达系统 | |
蛋白无活性 | 不正确的折叠 | 低温诱导表达 |
cDNA突变 | 质粒诱导表达前后测序保证无突变 |
掌握以上分析问题的能力,相信各位老师在今后的科研工作中定会事半功倍,处理各位蛋白表达难题定会游刃有余
经验总结,难免有疏漏之处,望各位老师直言批评;欢迎各位老师选用测试千纯生物的蛋白纯化填料。
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