福建水产设备联盟

蛋白质芯片检测适用样品 & 样品收集方法(修正版)

RayBio资讯 2022-07-30 10:21:20

蛋白芯片原理

一、适用于蛋白质芯片的常见样品


血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液;除了这些常见的样品,全世界客户使用RayBiotech抗体芯片产品检测成功的特殊样品还有尿液、眼泪、唾液、痰、脑脊液、前列腺液、腹腔注射液、奶水、初乳、支气管肺泡灌洗液、脓肿液、中耳液、血小板释放物、骨头裂解液等。

 

组织裂解液一般比较容易造成芯片的背景较高,目前有客户使用RayBiotech抗体芯片发表文献测试过的组织裂解液有肺组织、支气管、子宫内膜组织,肝脏组织,宫颈肿瘤、脾、脑组织、宫颈组织、囊肿组织等,这些组织裂解液做出芯片结果的背景一般都在可以接受的范围内,但是不能排除一些非常罕见的组织裂解液对芯片信号背景影响较大。


二、样品收集方法


1
血清

收集全血至普通离心管或者采血管(BD vacutainer公司的红头真空采血管,不含抗凝剂、防腐剂或者分离剂),4°C放置30-45min,以3000-5000rpm/min离心10min,取上清检测或者冻存(-20或-80°C)。


2
血桨

收集全血至BD vacutainer公司的EDTAK2、肝素锂、或者枸橼酸钠等真空采血管,以3000-5000rpm/min离心10min,取上清检测或者冻存(-20或-80°C)。


3
尿液

收集不添加稳定剂的尿液样本,高速离心样本(如:10000rpm离心5min或5000rpm离心10min),取上清分装,利用干冰或甲醇浴使样本迅速结冻,储存于-80°C备用。


4
细胞上清(条件培养基)

血清中含有部分细胞因子,所以最好制备无血清或低血清条件培养基。在第0天,于100mm培养皿中加入完全培养基,然后接种1ⅹ106个细胞,培养第3天,倒掉培养基,加入6-8ml低血清培养基(如含有0.2%牛血清的培养基);第5天,收集低血清的培养基于15ml离心管中,2000rpm、4°C离心10min,收集上清,分装于1.5ml EP管中,储存于-80°C中,可以保存1年以上。不同细胞可根据生长状况确定培养时间。


Tips:细胞上清归一化方法


对于细胞上清的检测,接种同样数量的细胞、加入同样体积培养基进行培养刺激,如果细胞生长未受到影响,收集上清时细胞数目不变,细胞上清可稀释同样的倍数来检测;如果细胞数目有变化,样品之间归一化方法建议有两种:

收集细胞上清后,对细胞进行计数,根据计数的结果来调整细胞上清的上样比值,使不同样品根据细胞数量归一化后上样检测,芯片检测所得的细胞因子信号结果可进行对比;


收集细胞上清后,可将细胞裂解,然后蛋白浓度定量,根据得到的蛋白浓度来调整细胞上清的上样比值,使不同样品根据细胞裂解后蛋白浓度来归一化后上样检测,芯片检测所得的细胞因子信号结果可进行对比。


5
细胞裂解液

细胞长满培养皿(d=10cm)时,(数量约为106-108)将上清吸掉,用PBS(4°C)清洗2次细胞,加入200-500μl细胞裂解液,(或者参照您购买的裂解液说明书),快速将细胞从培养板刮下,收集细胞裂解液,加入微量离心管中,使用涡旋振荡器振荡混合30min。14000rpm、4°C离心混合液15-20min,将清澈上清转入干净的离心管中(确保只吸取上层清澈细胞裂解液上清,如果上清出现絮状或者浑浊,将细胞裂解液上清转入干净的离心管中,于14000rpm、4°C再次离心15-20min后取上清)。建议裂解蛋白浓度至少2mg/ml,上样时稀释倍数约5-10倍。


6
组织裂解液

将组织切成小块,转移至2ml离心管,建议10mg组织加入500μl裂解液(或者参照您购买的裂解液说明书),冰上静置15-25min,使用均质机将组织打碎,14000rpm、4°C离心混合液15-20min,将清澈上清转入干净的离心管中(确保只吸取顶层清澈细胞上清,如果上清出现絮状或者浑浊,将细胞上清转入干净的离心管中,14000rpm、4°C再次离心15-20min后取上清)。



RayBiotech作为国际领先的蛋白芯片和免疫产品专业供应商,拥有世界上种类最多的抗体芯片及ELISA及产品,其产品检测灵敏度高,种属多样,包括涵盖人、小鼠、大鼠、猪、马、牛、猴、犬、猫、兔等多个种属。使用RayBio公司产品发表的文献达到数千篇。


做芯片,找RayBiotech!